milmedВоенная медицинаMilitary Medicine2074-5044Белорусский государственный медицинский университетmilmed-599Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ НАУЧНЫЕ ПУБЛИКАЦИИ. Новые технологии в медицинеORIGINAL SCIENTIFIC PUBLICATIONS. New technologies in medicineАдаптированный метод полимеразной цепной реакции для выявления вируса гепатита е у человека и животныхAdapted method of polymerase chain reaction for detecting hepatits e virus for people and animalАрабейА. А.ArabeyA. A.МарчукС. И.MarchukS. I.ЖаворонокС. В.ZhavoronokS. V.ДавыдовВ. В.DavydovV. V.КюрегянК. К.KyureghyanK. K.

Москва 

МихайловМ. И.MikhailovM. I.

Москва 

УО «Белорусский государственный медицинский университет»BelarusФГБНУ Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток, им. И. И. МечниковаRussian Federation201822102026038692Copyright © Арабей А.А., Марчук С.И., Жаворонок С.В., Давыдов В.В., Кюрегян К.К., Михайлов М.И., 20262026Арабей А.А., Марчук С.И., Жаворонок С.В., Давыдов В.В., Кюрегян К.К., Михайлов М.И.Arabey A.A., Marchuk S.I., Zhavoronok S.V., Davydov V.V., Kyureghyan K.K., Mikhailov M.I.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://milmed.ejournal.by/jour/article/view/599

Описан адаптированный метод гнездовой ОТ-ПЦР для выявления вируса гепатита Е. Проведена сравнительная характеристика предложенного метода с существующими импортными аналогами. Показана высокая специфичность метода, позволяющего определять РНК ВГЕ в образцах сыворотки крови, тканей и экстрактах фекалий различных млекопитающих, в том числе и человека. Установлена высокая чувствительность предложенного метода, имеющего низкий пороговый уровень выявляемой концентрации ВГЕ, составляющий 10 МЕ/мл.

An adapted method of nested RT-PCR for the detection of the hepatitis E virus has been described. A comparative characteristic of the proposed method with existing import analogues has been made. The high specificity of the method allowing to determine the HEV RNA in samples of blood serum, tissues and extracts of feces of various mammals, including humans, is shown. The high sensitivity of the proposed method, which has a low threshold level of detectable concentration of HEV of 10 IU/ml, is established.

Вирус гепатита Егнездовая полимеразная цепная реакции с обратной транскрипциейHepatitis E virusnested reverse transcriptase-polymerase chain reactionReferencesBalayan M. S. Brief report: experimental hepatitis E infection in domestic pigs // Journal of Medical Virology. – 1990. – Vol. 32, № 1. – P. 58–9.Balayan M. S. Brief report: experimental hepatitis E infection in domestic pigs // Journal of Medical Virology. – 1990. – Vol. 32, № 1. – P. 58–9.Doceul, V., Bagdassarian, E., Demange, A., Pavio, N. & Zoonotic Hepatitis, E. Virus: Classification, Animal Reservoirs and Transmission Routes. Viruses 8, E270 (2016).Doceul, V., Bagdassarian, E., Demange, A., Pavio, N. & Zoonotic Hepatitis, E. Virus: Classification, Animal Reservoirs and Transmission Routes. Viruses 8, E270 (2016).Гепатит Е. Информационный бюллетень. Июль 2016 г. www.who.int/mediacentre/factsheets/fs280/ru.Гепатит Е. Информационный бюллетень. Июль 2016 г. www.who.int/mediacentre/factsheets/fs280/ru.Khuroo M. S., Teli M. R., Skidmore S., et al. Incidence and severity of viral hepatitis in pregnancy. Am J Med. 1981; Vol. 70: 252-255.Khuroo M. S., Teli M. R., Skidmore S., et al. Incidence and severity of viral hepatitis in pregnancy. Am J Med. 1981; Vol. 70: 252-255.Doceul, V., Bagdassarian, E., Demange, A., Pavio, N. & Zoonotic Hepatitis, E. Virus: Classification, Animal Reservoirs and Transmission Routes. Viruses 8, E270 (2016).Doceul, V., Bagdassarian, E., Demange, A., Pavio, N. & Zoonotic Hepatitis, E. Virus: Classification, Animal Reservoirs and Transmission Routes. Viruses 8, E270 (2016).Meng, X. J. Recent advances in hepatitis E virus // J Viral Hepat. 2010. № 17. P. 153–161.Meng, X. J. Recent advances in hepatitis E virus // J Viral Hepat. 2010. № 17. P. 153–161.Pavio, N., Meng, X.-J., Doceul, V. Zoonotic origin of hepatitis E. Curr. Opin. Virol. 2015, 10, 34–41.Pavio, N., Meng, X.-J., Doceul, V. Zoonotic origin of hepatitis E. Curr. Opin. Virol. 2015, 10, 34–41.Nidaira, M., Takahashi, K., Ogura, G., Taira, K., Okano, S., Kudaka, J., Itokazu, K., Mishiro, S., Nakamura, M. Detection and phylogenetic analysis of hepatitis E viruses from mongooses in Okinawa, Japan. J. Vet. Med. Sci. 2012, 74, 1665–1668.Nidaira, M., Takahashi, K., Ogura, G., Taira, K., Okano, S., Kudaka, J., Itokazu, K., Mishiro, S., Nakamura, M. Detection and phylogenetic analysis of hepatitis E viruses from mongooses in Okinawa, Japan. J. Vet. Med. Sci. 2012, 74, 1665–1668.Caruso, C., Modesto, P., Prato, R., Scaglione, F. E., De Marco, L., Bollo, E., Acutis, P. L., Masoero, L., Peletto, S. Hepatitis E Virus: First description in a pet house rabbit. A new transmission route for human? Transbound. Emerg. Dis. 2015, 62, 229–232.Caruso, C., Modesto, P., Prato, R., Scaglione, F. E., De Marco, L., Bollo, E., Acutis, P. L., Masoero, L., Peletto, S. Hepatitis E Virus: First description in a pet house rabbit. A new transmission route for human? Transbound. Emerg. Dis. 2015, 62, 229–232.Lhomme, S., Dubois, M., Abravanel, F., Top, S., Bertagnoli, S., Guerin, J.-L., Izopet, J. Risk of zoonotic transmission of HEV from rabbits. J. Clin. Virol. 2013, 58, 357–362.Lhomme, S., Dubois, M., Abravanel, F., Top, S., Bertagnoli, S., Guerin, J.-L., Izopet, J. Risk of zoonotic transmission of HEV from rabbits. J. Clin. Virol. 2013, 58, 357–362.Lu L, Li C, Hagedorn CH. / Phylogenetic analysis of global hepatitis E virus sequences: genetic diversity, subtypes and zoonosis. Rev. Med. Virol. 2006. 16:5–36.Lu L, Li C, Hagedorn CH. / Phylogenetic analysis of global hepatitis E virus sequences: genetic diversity, subtypes and zoonosis. Rev. Med. Virol. 2006. 16:5–36.Smith, D. B., Simmonds, P., Jameel, S., Emerson, S. U., Harrison, T. J., Meng, X.-J., Okamoto, H.; Van der Poel, W. H. M., Purdy, M. A., et al. Consensus proposals for classification of the family Hepeviridae. J. Gen. Virol. 2014, 95, 2223–2232.Smith, D. B., Simmonds, P., Jameel, S., Emerson, S. U., Harrison, T. J., Meng, X.-J., Okamoto, H.; Van der Poel, W. H. M., Purdy, M. A., et al. Consensus proposals for classification of the family Hepeviridae. J. Gen. Virol. 2014, 95, 2223–2232.Woo, P. C. Y., Lau, S. K. P., Teng, J. L. L., Tsang, A. K. L., Joseph, M., Wong, E. Y. M., Tang, Y., Sivakumar, S., Xie, J., Bai, R., Wernery, R., et al. New hepatitis E virus genotype in camels, the Middle East. Emerg. Infect. Dis. 2014, 20, 1044–1048.Woo, P. C. Y., Lau, S. K. P., Teng, J. L. L., Tsang, A. K. L., Joseph, M., Wong, E. Y. M., Tang, Y., Sivakumar, S., Xie, J., Bai, R., Wernery, R., et al. New hepatitis E virus genotype in camels, the Middle East. Emerg. Infect. Dis. 2014, 20, 1044–1048.Мохаммед А. М., Потемкин И. А., Карлсен А. А., Исаева О. В., Кюрегян К. К., Козлов В. Г., Жаворонок С. В., Михайлов М. И. Циркуляция вируса гепатита е кроликов на территориях с разной степенью эндемичности по гепатиту Е // Современные проблемы науки и образования. 2015. № 2. С. 64.Мохаммед А. М., Потемкин И. А., Карлсен А. А., Исаева О. В., Кюрегян К. К., Козлов В. Г., Жаворонок С. В., Михайлов М. И. Циркуляция вируса гепатита е кроликов на территориях с разной степенью эндемичности по гепатиту Е // Современные проблемы науки и образования. 2015. № 2. С. 64.Жаворонок С. В., Арабей А. А., Зновец Т. В., Яговдик Е. Н., Давыдов В. В., Красочно П. А. Кюрегян К. К., Михайлов М. М., Алаторцева Г. И. Вирусный гепатит Е среди различных животных и людей в Республике Беларусь. Материалы III всероссийской научно-практ. конференции с международным участием. Москва: Изд. «Ваш полиграфический партнер», Сочи, 2016. – C. 136–138.Жаворонок С. В., Арабей А. А., Зновец Т. В., Яговдик Е. Н., Давыдов В. В., Красочно П. А. Кюрегян К. К., Михайлов М. М., Алаторцева Г. И. Вирусный гепатит Е среди различных животных и людей в Республике Беларусь. Материалы III всероссийской научно-практ. конференции с международным участием. Москва: Изд. «Ваш полиграфический партнер», Сочи, 2016. – C. 136–138.Арабей А. А., Мохаммед А. М. Е., Жаворонок С. В., Кюрегян К. К., Бутько Л. В., Давыдов В. В., Михайлов М. И. / Обнаружение вируса гепатита Е среди кроликов в Республике Беларусь // Военная медицина. – 2015. – № 2. – С. 51–54.Арабей А. А., Мохаммед А. М. Е., Жаворонок С. В., Кюрегян К. К., Бутько Л. В., Давыдов В. В., Михайлов М. И. / Обнаружение вируса гепатита Е среди кроликов в Республике Беларусь // Военная медицина. – 2015. – № 2. – С. 51–54.Baylis SA, Hanschmann KM, Blumel J, Nubling CM. / Standardization of hepatitis E virus (HEV) nucleic acid amplification techniquebased assays: an initial study to evaluate a panel of HEV strains and investigate laboratory performance. J. Clin. Microbiol. 2011. 49:1234–1239.Baylis SA, Hanschmann KM, Blumel J, Nubling CM. / Standardization of hepatitis E virus (HEV) nucleic acid amplification techniquebased assays: an initial study to evaluate a panel of HEV strains and investigate laboratory performance. J. Clin. Microbiol. 2011. 49:1234–1239.Huang S, Zhang X, Jiang H, Yan Q, Ai X, Wang Y, Cai J, Jiang L, Wu T, Wang Z, Guan L, Shih JW, Ng MH, Zhu F, Zhang J, Xia N. Profile of acute infectious markers in sporadic hepatitis E. PLoS One, 2010. 5:e13560.Huang S, Zhang X, Jiang H, Yan Q, Ai X, Wang Y, Cai J, Jiang L, Wu T, Wang Z, Guan L, Shih JW, Ng MH, Zhu F, Zhang J, Xia N. Profile of acute infectious markers in sporadic hepatitis E. PLoS One, 2010. 5:e13560.Ruggeri, F. M., Di Bartolo, I., Ostanello, F., Trevisani, M. Hepatitis E virus. An emerging zoonotic and foodborne pathogen. Springer, 2013, p. 56–57.Ruggeri, F. M., Di Bartolo, I., Ostanello, F., Trevisani, M. Hepatitis E virus. An emerging zoonotic and foodborne pathogen. Springer, 2013, p. 56–57.Gyarmati P, Mohammed N, Norder H, Blomberg J, Belak S, Widen F. Universal detection of hepatitis E virus by two real-time PCR assays: TaqMan and Primer-Probe Energy Transfer. J. Virol. Methods. 2007, 146:226–235.Gyarmati P, Mohammed N, Norder H, Blomberg J, Belak S, Widen F. Universal detection of hepatitis E virus by two real-time PCR assays: TaqMan and Primer-Probe Energy Transfer. J. Virol. Methods. 2007, 146:226–235.Jothikumar N, Cromeans TL, Robertson BH, Meng XJ, Hill VR. A broadly reactive one-step real-time RT-PCR assay for rapid and sensitive detection of hepatitis E virus. J. Virol. Methods, 2006 131:65–71.Jothikumar N, Cromeans TL, Robertson BH, Meng XJ, Hill VR. A broadly reactive one-step real-time RT-PCR assay for rapid and sensitive detection of hepatitis E virus. J. Virol. Methods, 2006 131:65–71.Garson JA, Ferns RB, Grant PR, Ijaz S, Nastouli E, Szypulska R, Tedder RS. Minor groove binder modification of widely used TaqMan probe for hepatitis E virus reduces risk of false negative real-time PCR results. J. Virol. Methods, 2012; 186:157–160.Garson JA, Ferns RB, Grant PR, Ijaz S, Nastouli E, Szypulska R, Tedder RS. Minor groove binder modification of widely used TaqMan probe for hepatitis E virus reduces risk of false negative real-time PCR results. J. Virol. Methods, 2012; 186:157–160.Zhang X, Li A, Shuai J, Dai Y, Zhu Z, Wu S, He Y. Validation of an internally controlled multiplex real time RT-PCR for detection and typing of HEV genotype 3 and 4. J. Virol. Methods, 2013;193:432–438.Zhang X, Li A, Shuai J, Dai Y, Zhu Z, Wu S, He Y. Validation of an internally controlled multiplex real time RT-PCR for detection and typing of HEV genotype 3 and 4. J. Virol. Methods, 2013;193:432–438.Xia J, Zeng H, Liu L, Zhang Y, Liu P, Geng J, Wang L, Wang L, Zhuang H. Swine and rabbits are the main reservoirs of hepatitis E virus in China: detection of HEV RNA in feces of farmed and wild animals. Arch Virol., 2015 Nov;160(11):2791-8.Xia J, Zeng H, Liu L, Zhang Y, Liu P, Geng J, Wang L, Wang L, Zhuang H. Swine and rabbits are the main reservoirs of hepatitis E virus in China: detection of HEV RNA in feces of farmed and wild animals. Arch Virol., 2015 Nov;160(11):2791-8.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.